免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)功能的實(shí)驗(yàn)方法。Co-IP是在IP的基礎(chǔ)上衍生出來(lái)的實(shí)驗(yàn)方法，是證明蛋白相互作用的金標(biāo)準(zhǔn)。通過(guò)檢測(cè)免疫沉淀下來(lái)的蛋白復(fù)合物來(lái)證實(shí)中是否存在與X蛋白相互作用的Y蛋白。

其基本原理是，在細(xì)胞裂解液中加入抗X蛋白的抗體，孵育后再加入與抗體FC片段特異結(jié)合的Protein A/G-瓊脂糖微珠，若細(xì)胞中有與Y結(jié)合的X蛋白，就可以形成這樣一種復(fù)合物： Y—X—抗X抗體—Protein A或G ，經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，復(fù)合物又被分開(kāi)。然后經(jīng)免疫印跡或質(zhì)譜檢測(cè)目的蛋白。這種方法得到的目的蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合體內(nèi)實(shí)際情況，得到的結(jié)果可信度高。

實(shí)驗(yàn)流程：

1）構(gòu)建相關(guān)真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染細(xì)胞并獲得表達(dá)；

2）蛋白質(zhì)抽提與定量；

3）免疫沉淀（以normal IgG作為對(duì)照）；

4）免疫沉淀產(chǎn)物SDS-PAGE和western blot分析；

5）完整技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)報(bào)告提交。

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