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細(xì)胞凋亡(Apoptosis)是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。作為細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象,細(xì)胞凋亡是機(jī)體為更好地適應(yīng)生存環(huán)境,而主動爭取的一種死亡過程,它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用,一般過程包括4個階段,即:誘導(dǎo)啟動、細(xì)胞內(nèi)調(diào)控、實施和凋亡細(xì)胞的吞噬搬運(yùn)。細(xì)胞凋亡不僅是一種特殊的細(xì)胞死亡類型,而且具有重要的生物學(xué)意義及復(fù)雜的分子生物學(xué)機(jī)制。

細(xì)胞凋亡對胚胎發(fā)育及形態(tài)發(fā)生、組織內(nèi)正常細(xì)胞群的穩(wěn)定、機(jī)體的防御和免疫反應(yīng)、疾病或中毒時引起的細(xì)胞損傷、老化、腫瘤的發(fā)生進(jìn)展起著重要作用,并具有潛在的治療意義,一直是生物醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。

除了傳統(tǒng)的凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測,細(xì)胞凋亡的檢測方法多種多樣,且根據(jù)凋亡早期和晚期的樣品,選擇不同的檢測手段。

檢測細(xì)胞凋亡的方法有流式檢測細(xì)胞凋亡(Annexin V/PI染色)和TUNNEL檢測細(xì)胞凋亡。

磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),但在細(xì)胞凋亡的早期(或細(xì)胞損傷時),PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin V是一種Ca2+依賴的磷脂結(jié)合蛋白,具有易于結(jié)合PS的特性,可充當(dāng)敏感的探針檢測暴露在細(xì)胞膜表面的PS。碘化丙啶(Propidine Iodide, PI)是一種核酸染料,不能透過完整的細(xì)胞膜,但能夠透過凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞的細(xì)胞膜,從而使細(xì)胞核染成紅色。將Annexin V和PI一起使用,可以將凋亡早期、晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。

實驗流程:

1、細(xì)胞收集

2、細(xì)胞洗滌

3、細(xì)胞標(biāo)記

4、流式細(xì)胞儀分析

5、結(jié)果判斷

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